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Culture des arbres tropicaux, subtropicaux et des plantes exotiques / Cultivation of tropical and subtropical trees
 
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 Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro

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MessageSujet: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro EmptySam 7 Avr 2012 - 23:21

Bonsoir,

Je joins une formulation simplifiée de milieu de culture in vitro, en l'absence de milieu Murashige et Skoog.

Préparer les 5 solutions mères suivantes :

- Urée : 5,4 g (env. ½ cuillère à soupe pour 1 L d'eau de pluie ou distillée),

- Di-hydrogénophosphate d'ammonium NH4H2PO4 : 3,45 g (env. ½ petite cuillère pour 1 L d'eau de pluie ou distillée),

- Acétate de calcium Ca(CH3COO)2 : 0,79 g (env. ½ petite cuillère pour 1 L d'eau de pluie ou distillée),

- Acétate de potassium KCH3COO : 3,92 g env. ¼ (cuillère à soupe pour 1 L de pluie ou distillée),

- Sulfate de magnésium MgSO4.7H2O : 3,69 g (env. ½ petite cuillère pour 1 L de pluie ou distillée).


Pour 1 litre de solution pour le milieu gélosé :

- 100 mL de chacune des 5 solutions,

- 1 produit anti-chlorose pour plante acidophile à utiliser selon les doses indiquées sur l'étiquette pour une pulvérisation foliaire.

- 30 g de saccharose = sucre en poudre (env. 5 petites cuillères).

Faire dissoudre le sucre puis ajuster le volume à 1 litre avec de l'eau de pluie, de l'eau distillée ou minérale faiblement minéralisée, (l'eau minérale apportera les oligo-éléments nécessaires à une bonne croissance).

Ajouter 10 à 15 g d'agar-agar (env. 4-6 petites cuillères), faire bouillir jusqu'à ce que l'agar-agar soit dissout, puis verser dans les flacons de culture. Le but de l'agar-agar est de solidifier le milieu.

Placer dans un autocuiseur avec un peu d'eau dans le fond puis stériliser sous pression pendant environ 20 min. après que la vapeur ait commencée à sortir par la soupape de sécurité.

A leur sortie de l'autocuiseur, les flacons contenant la gélose encore liquide sont déposés de manière à obtenir une surface suffisamment large pour étaler les prélèvements. Laisser la gélose durcir à température ambiante sans bouger les flacons, pendant plusieurs heures.

Les flacons ne doiventt pas être fermés hermétiquement. Il convient de faire un trou dans le bouchon et d'y mettre une mèche de coton qui permettra les échanges gazeux (CO2 nécessaire à la croissance) tout en filtrant les spores de bactéries et de champignons.

Placer sous lampe horticole plein spectre les flacons.
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pivoine51
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MessageSujet: Re: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro EmptyVen 13 Avr 2012 - 17:08

bjr séquo,

j'ai lu attentivement ta formulation que j'aimerai tester, mais j'ai besoin que tu m'éclaires sur certains points :

où puis je me procurer ces composants comme l'urée, le di-hydrogénophosphate d'ammonium, l'acétate de calcium, etc ...en jardineries, en pharmacies, ou drogueries ?

ensuite si j'ai bien compris pour chaque solution mère il faut 1l d'eau de pluie ?

je n'ai pas de lampe horticole, puis je mettre les boites près d'une baie vitrée avec soleil direct ?

merci de bien vouloir éclairer ma lanterne
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MessageSujet: Re: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro EmptyVen 13 Avr 2012 - 17:19

Hello Pivoine,

Tu dois pouvoir trouver les composants en pharmacie et en droguerie. De l'eau distillée fait l'affaire.

Par contre, il faut une lampe horticole à plus de 4500 kelvins.
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pivoine51
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MessageSujet: Re: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro EmptyVen 13 Avr 2012 - 17:48

séquoia,
l'éclairage pour combien d'heure / jour ? ou 24/24h ? et à combien la température jour et nuit ?
et comment choisis tu les échantillons de culture ?
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MessageSujet: Re: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro EmptyVen 13 Avr 2012 - 18:41

Pardon, j'ai oublié. 18 heures par jour pendant 2 semaines, puis 12 heures par jour pendant 3 semaines. Tu prends les bourgeons terminaux pour faire tes échantillons.
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MessageSujet: Re: Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro   Formulation simplifiée de milieu de culture in vitro Empty

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